Fluorescencja

[sebba28]

Dzieki JohnyM za przydatne informacje.
Nie mam jeszcze diody UV,uzywam narazie zimnego LEDa 3w,filtr ktory umieszczam przed nim do wzbudzenia ,rzeczywiscie nie jest w najlepszym stanie w dodatku ma powloki lustrzane po obu stronach.
Z filtrow ktore mam jedne sa z powlokami lustrzanymi
(niebieski,zielony,pomaranczowy,czerwony),bez powlok ze slajdera (pomaranczowy,zolty,jasno zolty,niebieski) i tak sie zastanawiam czy moge cos z tego wykombinowac.
Ponizej kilka zdjec z uzyciem DF i bez,oraz ten sam glon po zabarwieniu (inne powiekszenie).

bez DF

w DF

DF

Tutaj jest filmik jak zrobic Fluorescein:

[planapo]

Natknalem sie na fajny dla poczatkujacych w FL pdf objasniajacy oznaczenia kostek, chyba stosunkowo nowy bo wspominaja o noise terminator co wprowadzono przy serii i".

[Pickul]

JohnyM mam kostkę UV (na dobrą sprawę to nie wiem) jest na niej tylko logo Leica.
Jeden filtr jest przeźroczysty, lustro przeźroczyste, drugi bardzo ciemny prawie czarny. Czarny filtr (barierowy ?) nie przepuszcza światła LED, halogenowe przepuszcza słabiutko.
Czy to kość UV ?
Pytanie bardzo nieprofesjonalne, po prostu nie wiem
Czy patrząc w okulary przy UV w ogóle coś widać czy dopiero aparat widzi obraz ?

[JohnyM]

Filtr wzbudzający powinien być praktycznie czarny (szkło pochłaniające schotta[stary typ]) albo lustrzany (powłoka interferencyjna odbijająca światło[nowy typ]), bo wycina światło widzialne. Lustro jest przeźroczyste, bo przepuszcza światło VIS a odbija UV. Barierówka powinna być przeźroczysta, bo przepuszcza VIS a odbija UV - czyli tak jak u ciebie.

Eventualnie może to być kosta V - bo przepuszcza trochę halogenu.

Normalnie emisję z fluorescencji UV widać w okularach - bo nadaje światło V, B (głównie), G i R - ale halogen nie ma wystarczająco dużo UV i V do wzbudzenia fluorescencji (u mnie już na kostce V nie daje rady - tu używam HBO, ale ostatnio zdechł mi zasilacz i jestem aktualnie bez fluorescencji ).

Aparat może zobaczyć oczywiście więcej - duże iso i długi czas.

[Pickul]

Dziękuje bardzo

[Pickul]

Zmieniłem oświetlenie z leda na halogem 100W.
Plusy:
- doskonałe wypełnienie pola widzenia (duży żarnik),
- kilkakrotny wzrost efektywności kostki zielonej, zachowuje się prawie jak niebieska na ledzie. Wcześniej używałem jej bardzo rzadko.

Minusy:
- szybki nagrzewanie się oświetlacza, przy ledzie nie był nigdy nawet ciepły, teraz po dłuższej pracy muszę odczekać żeby ostygł.
- wyraźna strata efektywności emisji niebieskiej (to największy ból)

JohnyM pytanie kieruje do wszystkich, ale pewnie tylko Ty będziesz mógł się wypowiedzieć.

Dlaczego jeżeli używam światła odbitego, które przepuszczam przez filtr wzbudzający np. niebieski i na okular montuje filtr barierowy do emisji B nie dostaje poprawnej fluorescencji (wiem że w przypadku epi mam w kostce jeszcze lustro) ? Wychodzi z tego wielkie nic.

Mam leda o emisji UV 395-400 i barierówkę od Leica, działając w sposób opisany powyżej dostaję coś nie do końca poprawnego.
(foto w załączeniu)

Co robię źle ?

[JohnyM]

Różnica jest spora, a 100W robi swoje, dlatego halogen jest dedykowany do fluorescencji zielonej a do niebieskiej ma specjalne kostki, jednak mimo wszystko i tak daje radę coś wzbudzić. HBO ma jeszcze mniej niebieskiego jeśli chodzi o relatywną intensywność w tym spektrum, jednak daje dużo więcej W z racji swojej mocy - także dla niebieskiej kostki LED jest najlepszym źródłem światła (zimny led).

Jak masz ustawione to epi? Przez lustro półprzepuszczalne czy oświetlenie skośne? A co ci się nie podoba w tym foto?

[Pickul]

Leda UV ustawiam tak jak przy zwykłym świetle odbitym, nie jest to epi, tylko właśnie takie skośne odbicie.
Mam wrażenie, że obiekt powinien być bardziej wyselekcjonowany, chociaż UV, daje inne efekty niż pozostałe zakresy fluorescencji.

[JohnyM]

Prawdę mówiąc, wszystko wygląda OK. Masz zrobione takie coś ala TIRF. Co Ci mogę poradzić, to filtr barierowy daj maksymalnie blisko preparatu (czyli tuż za obiektywem) a jeśli przecieka coś ze światła wzbudzającego, to zwiększ kąt padania światła wzbudzającego.

[planapo]

Swietne, gratulacje efektu! (:

[Pickul]

Dziękuję, pokombinuje.

[Pickul]

Rzeczywiście wszystko OK. Musiałem sprawdzić na czymś co już widziałem we fluo UV.

Sporo pracy jeszcze przede mną, ale kierunek jest dobry

[JohnyM]

Super