Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie podzia

Mikroskopy, preparaty, sprzęt, metody utrwalania i barwienia preparatów, zdjęcia mikroskopowe, mikrofotografia, metodyka, bioindykacja
Awatar użytkownika
Laks110
Posty: 13
Rejestracja: 15 gru 2012, o 19:41

Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie podzia

Post autor: Laks110 »

Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie podział jądra?
AnnaWP
Posty: 3453
Rejestracja: 24 wrz 2010, o 12:58

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: AnnaWP »

Przede wszystkim trzeba utrwalić materiał. Dla tkanek roślinnych wystarczy HCl + etanol - ja mam naważki kwasu, robię to w stosunku 1:1 ze spirytusem i działa.

Po utrwaleniu wypłukuję 70% alkoholem.

Maceruję.

Barwienie np. safraniną, ale jak dobrze się zrobi to nawet fiolet gencjany trochę podbarwia chromosomy.
Inne barwniki - orceina, nigrozyna - wymagają więcej zabawy.
JohnyM

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: JohnyM »

Fluorescencja, bo chcesz widzieć cały proces? Po utrwaleniu to raczej podziału sobie nie zaobserwuje.
Awatar użytkownika
Laks110
Posty: 13
Rejestracja: 15 gru 2012, o 19:41

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: Laks110 »

wlasnie chce widziec caly proces
AnnaWP
Posty: 3453
Rejestracja: 24 wrz 2010, o 12:58

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: AnnaWP »

To polecam fluorescencję - mikroskop nawet na 60 tys. a jeszcze lepiej konfokalny, miałam przyjemność zobaczyć, oczywiście chromatyna sama z siebie nie świeci, aby widzieć bez traktowania barwnikami, zastosowali GMO - znakowane GFP były histony któreś.

Jak wchodzi w rachubę sprzętowo - polecam.

Natomiast dla boroczków na świetlnych mikroskopach nadal polecam utrwalanie, widać komórki na różnych stadiach procesu, można spokojnie poskładać to w całość.
JohnyM

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: JohnyM »

Ja tylko daję odpowiedź na pytanie autora, miała go zmotywować do poczytania zamiast wymyślania eksperymentów. A tak swoją drogą, to fluorescencja jest w zasięgu ręki, niedługo jak dostanę zamówiony sprzęt i aparat to może co nieco tutaj zaprezentuję.
Awatar użytkownika
Laks110
Posty: 13
Rejestracja: 15 gru 2012, o 19:41

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: Laks110 »

Dziękuje za przekazane informację. Lecz chodziło mi o konkretne informację. Chcę zobaczyć podział jądra komórkowego w ruchu mikroskopem świetlnym. Moje pytanie brzmi: Czy można to zrobić mikroskopem świetlnym? Jeśli tak to czym mogę zabarwić preparat?
AnnaWP
Posty: 3453
Rejestracja: 24 wrz 2010, o 12:58

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: AnnaWP »

Barwniki barwiące chromatynę raczej przeszkadzają w jej funkcjonowaniu, nie sądzisz?
Aby wybarwić musisz utrwalić. A zatem w świetlnym musisz mieć preparat martwy i obserwować etapy zatrzymane w czasie.

Jeśli masz odpowiednio cienki preparat, można spróbować w bardzo dobrym kontraście, ale nie wiem jaki to miałby być preparat. Zygota może.
JohnyM

[Link] Jak wybarwić ładnie chromatynę

Post autor: JohnyM »

W fluorescencji utrwalać nie trzeba, ale rzeczywiście nie znam fluorochromu który wybarwi chromatynę nie uszkadzając jej funkcji (co nie znaczy że taki nie istnieje), choć komórka przez pewien czas pozostaje jeszcze żywa. Tu jest ciekawy materiał z przykładowym zastosowaniem oranżu akrydyny w okolicy naszego tematu, jednak podziały komórkowe zostały zatrzymane:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11062716
Za to nie koniecznie trzeba barwić chromatynę. Widać, że wybarwienie histonów nie upośledza czynności komórki a ciągle sporo widać. Można by oczywiście zastosować mniejsze odstępy między klatkami i większe powiększenie jądra.

Kod: Zaznacz cały

olympusmicro.com/moviegallery/confocal/rk13mkoh2b/index.html
Ciekawe mogłoby być także w tym temacie wybarwienie mikrotubul. Poszukam, może coś znajdę.
AnnaWP
Posty: 3453
Rejestracja: 24 wrz 2010, o 12:58

Re: Jak wybarwić ładnie chromatynę, aby było widać ładnie po

Post autor: AnnaWP »

Jak wyżej - obserwowałam zmodyfikowane Arabidopsis, gdzie do genu histonu, bodaj H1, doczepili gen GFP. Samo świeciło ślicznie. Widać było podziały w korzeniu, a konfokal umożliwiał zrobienie precyzyjnego przekroju optycznego lub spłaszczenie grubszej tkanki. To było genialne i widzieliśmy całą praktycznie mitozę, od późnej profazy do początku telofazy.

Tylko pozyskać takiego rzodkiewnika. dziękujemy ustawie o gmo, na pewno nie dostaniemy tego stwora do ręki w tej dziesięciolatce.

MT obija mi się, że barwili przyżyciowo, ale może się mylę. Mają sporo miejsc aktywnych, do których można przyczepić barwnik.
ODPOWIEDZ
  • Podobne tematy
    Odpowiedzi
    Odsłony
    Ostatni post

Kto jest online

Użytkownicy przeglądający to forum: Obecnie na forum nie ma żadnego zarejestrowanego użytkownika i 2 gości