Wytrącanie DNA z cebuli

Specjalistyczne forum biotechnologiczne. Metody biotechnologiczne: real-time PCR, western-blot, dot-blot, barwienie, chromatografia, dializa. Zakup, stosowanie odczynników: enzymy restrykcyjne, polimerazy DNA, drabinki i markery białkowe, kwasy nukleinowe, primery do sekwencjonowania, pożywki bakteryjne... Aparatura laboratoryjna, badawcza.
Lotar
Posty: 1
Rejestracja: 17 gru 2008, o 18:01

Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Lotar »

Składniki: pół szklanki wody, sól, spirytus, cebula, płyn do mycia naczyń.

1. Szklankę napełnij do połowy wodą i wsyp do niej łyżeczkę soli. Dobrze wymieszaj.
2. Roztwór wlej do naczynia z dwiema łyżkami płynu do mycia naczyń. Uważaj, żeby się nie spieniło. Dodaj posiekaną cebulę.
3. „Zupę cebulową” ogrzewaj przez ok. 10 min. (najlepiej w garnku z gorącą wodą ). Potem stopniowo ochładzaj miksturę.
4. Zmiksuj (tylko przez ok. 3 sekundy).
5. Przepuść wszystko przez filtr do kawy. (Cierpliwości, trochę to potrwa).
6. Przelej wszystko do mniejszych naczyń (mogą być małe szklany kieliszki).
7. Uwaga, uwaga: punkt kulminacyjny. Do naczyń wlej zmrożony spirytus (mniej więcej tyle samo, co zielonej substancji), wlewaj ostrożnie, po ściance.
Spirytus utworzy przezroczystą warstwę nad zielonym płynem. Po chwili na załamaniu dwóch substancji zacznie się wytrącać DNA (kwas deoksyrybonukleinowy).

Doświadczenie jest świetne ale wymaga dużo czasu i paru prób(ja jestem początkujący i udalo mi sie po 2 próbie)

Życzę powodzenia:)
Awatar użytkownika
Artur999
Posty: 4
Rejestracja: 17 cze 2009, o 20:05

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Artur999 »

Witam
Doświadczenie wygląda naprawdę ciekawie. Ja zbieram materiały i siły do domowej elektroforezy, też po to, by wyizolować DNA z cebuli.

Mam jednak pewne pytanie. Potrzebny mi błękit metylenowy. Znalazłem takowy w sklepie akwarystycznym. Na 30ml znajduje się 150mg błękitu metylenowego*HCl oraz 450mg wersenianu miedzi.
Czy to wystarczy do eksperymentu? Czy wersenian miedzi może mieć wpływ jakikolwiek wpływ na przebieg doświadczenia?

Pozdrawiam serdecznie
Jakusz
Posty: 2313
Rejestracja: 8 sty 2007, o 22:03

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Jakusz »

Artur999 pisze:Witam
Doświadczenie wygląda naprawdę ciekawie. Ja zbieram materiały i siły do domowej elektroforezy, też po to, by wyizolować DNA z cebuli
Elektroforeza to tak za założenia nie służy stricte do izolacji DNA, a jedynie do rozdziału odcinków DNA różnej wielkości, więc samą elektroforezą DNA nie wyizolujesz.

Jeśli dobrze rozumiem to polska nazwa wersenian to sól EDTA, to raczej nie powinno mieć to wpływu na samą elektroforezę.
PeReS
Posty: 141
Rejestracja: 14 cze 2009, o 18:41

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: PeReS »

EDTA jest korzystne - chelatuje jony dwuwartosciowe, ktore sa potrzebne do dzialania endonukleaz-tnacych DNA. Efekt - lepszej jakosci DNA, nie bedzie pociete
Jakusz
Posty: 2313
Rejestracja: 8 sty 2007, o 22:03

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Jakusz »

PeReS, ale wersenian miedzi już nie ma miejsca, żeby coś chelatować
Awatar użytkownika
Artur999
Posty: 4
Rejestracja: 17 cze 2009, o 20:05

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Artur999 »

JakubikF pisze:PeReS, ale wersenian miedzi już nie ma miejsca, żeby coś chelatować
Co prawda nie wiem, skąd miałyby się wziąć tu endonuklezy, ale skoro EDTA mogłaby poprawić jakoś odcinków DNA, to może by strącić to Cu2+?

Dzięki za pomoc
PeReS
Posty: 141
Rejestracja: 14 cze 2009, o 18:41

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: PeReS »

no tak, nie zwrocilem uwagi i myslalem o sodowym

EDTA? - w tym doswiadczeniu raczej Ci to nie potrzebne, to DNA do niczego innego nie bedzie uzyte poza ogladaniem, wiec nie masz co sie martwic
Co do endonukleaz to sa one normalnym skladnikiem maszynerii komorkowej. U eukariotow(cebula) zwiazane sa glownie z naprawa uszkodzen DNA, u prokariotow(mieszkancy powierzchni rak i calej okolicy) stanowia element systemu RM zapobiegajacy przed infekcjami bakteriofagami czy inwazja na chromosom jakiegokolwiek obcego DNA. Po tej metodzie raczej spodziewalbym sie ze wszystko padlo po gotowaniu
Jakusz
Posty: 2313
Rejestracja: 8 sty 2007, o 22:03

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Jakusz »

Zamieszczam dokładniejszy protokół domowej izolacji DNA".

Lista odczynników:
• Jedna świeża cebula (lub np. 100g mrożonego zielonego
groszku, pomidor, brzoskwinia)
• 10ml nie skoncentrowanego płynu do naczyń (2 łyżki
stołowe)
• 4g soli kuchennej (łyżeczka do herbaty)
• 90ml wody (trochę mniej niż pół szklanki)
• 10ml 95% alkoholu z zamrażalnika (wstawić do zamrażalnika
w plastikowym naczyniu na dzień przed eksperymentem)
• Filtr do kawy
• Nóż + deseczka do krojenia cebuli
• Pojemnik na ok. 350ml na „zupę warzywną”
• Większy pojemnik pełniący rolę łaźni wodnej
• Mały mikser (ostrze tnące / rozdrabniające)
• Duży lejek
• Probówka do strącania DNA (np. kieliszek)
• Coś do wyciągnięcia DNA (np. patyczek szaszłykowy)
• Opcjonalnie szczypta soli do zmiękczania mięsa lub odrobina
świeżego soku z ananasa (nie z puszki!)

1. Rozpuścić całą sól kuchenną w wodzie
2. Wlać roztwór soli do naczynia z płynem do mycia naczyń i delikatnie wymieszać (żeby się nie spienił!).
3. Obrać cebulę i bardzo drobno pokroić w kostkę (im drobniej, tym lepiej – kawałki o boku około 0,5 cm są świetne, ale z nieco większymi też działa). Jeśli izolujemy DNA z mrożonego groszku, wystarczy go
rozgnieść widelcem.
4. Włożyć pokrojone kawałki do pojemnika i zalać roztworem soli kuchennej i płynu do mycia naczyń.
5. Pojemnik z „zupą cebulową” inkubować w temperaturze około 60 stopni (np. w garnku z gorącą wodą) przez 10-15 minut (nie dłużej!).
6. Następnie oziębić – np. włożyć na chwilę do pojemnika z zimną wodą lub lodem.
7. Całą mieszaninę zmiksować przez maksymalnie 3 sekundy.
8. Przefiltrować mieszaninę przez filtr do kawy do niedużego naczynia (np. plastikowego kubka). Uważać, żeby piana z detergentu w mieszaninie nie dostała się do przesączu!
9. Do przesączu w kubku dodać szczyptę soli do zmiękczania mięsa lub 5 kropli świeżego soku z ananasa. Pozostawić na 5 minut.
10. Przelać przesącz z kubka do kilku probówek. Zwykle z 1 cebuli powinniśmy otrzymać min. 50ml przesączu
11. Bardzo ostrożnie i powoli (najlepiej po ściance) nalać do probówki z przesączem taką samą objętość zimnego etanolu, ile jest przesączu, tak, aby alkohol utworzył nad nim warstwę.
12. Po chwili DNA będzie wytrącać się do warstwy alkoholowej
w postaci cienkich, długich, galaretowatych nitek z przyczepionymi bąbelkami powietrza. Można je spokojnie nawijać na patyczek i
wyjmować z alkoholu.
patrycja_h
Posty: 1
Rejestracja: 15 kwie 2010, o 21:10

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: patrycja_h »

czy wie ktoś może DLACZEGO obserwujemy wytrącenie nitek DNA z BĄBELKAMI? proszę o odpowiedź
Parolu
Posty: 1
Rejestracja: 30 lip 2010, o 11:26

Re: Wytrącanie DNA z cebuli

Post autor: Parolu »

Co to za drink?



Sory(nie mogłem się oprzeć)
ODPOWIEDZ
  • Podobne tematy
    Odpowiedzi
    Odsłony
    Ostatni post

Kto jest online

Użytkownicy przeglądający to forum: Obecnie na forum nie ma żadnego zarejestrowanego użytkownika i 1 gość