Białko terapeutyczne - doświadczenie

Specjalistyczne forum biotechnologiczne. Metody biotechnologiczne: real-time PCR, western-blot, dot-blot, barwienie, chromatografia, dializa. Zakup, stosowanie odczynników: enzymy restrykcyjne, polimerazy DNA, drabinki i markery białkowe, kwasy nukleinowe, primery do sekwencjonowania, pożywki bakteryjne... Aparatura laboratoryjna, badawcza.
Itachi90
Posty: 5
Rejestracja: 5 maja 2016, o 10:46

Białko terapeutyczne - doświadczenie

Post autor: Itachi90 » 5 maja 2016, o 10:50

Czy ktoś potrafi to rozwiązać, albo chociaż mniej więcej przybliżyć rozwiązanie?

"Białko X to 25kDa monomeryczna cząsteczka terapeuty
czna o
działaniu przeciwnowotworowym. Specyficznie rozpozn
aje struktury
zewnątrzkomórkowe obecne na komórkach nowotworowych
. W wyniku
oddziaływania ze strukturami blokuje wybrane szlaki
metaboliczne
prowadząc do śmierci komórek. Białko jest intensywn
ie internalizowane do
wnętrza komórek, gdzie ulega degradacji. Niestety e
fektywność białka X jest
niska.
Twoim zadaniem jest zaproponowanie domen/związków,
jakie można
byłoby dołączyć do białka X w celu otrzymania produ
ktu o lepszej
efektywności przeciwnowotworowej. Należy zaproponow
ać metodę i
warunki, w jakich należy przeprowadzić reakcję koni
ugacji. Pod uwagę
należy wziąć specyficzność i wydajność prowadzonego
procesu modyfikacji
białka. Dodatkowo proszę podać metody analityczne,
które należałoby użyć
do potwierdzenia tożsamości otrzymanego związku. W
jaki sposób wydzielić z
mieszaniny reakcyjnej czysty produkt?"

Z góry dziękuję! :)

Awatar użytkownika
Mårran
Posty: 4109
Rejestracja: 8 kwie 2008, o 19:17
Lokalizacja: Toruń/Gdańsk

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Mårran » 5 maja 2016, o 16:50

Mogłeś chociaż sformatować ten tekst, żeby dało się go przeczytać bez oczopląsu.

Może spróbuj z jakimś przeciwciałem przeciw antygenom charakterystycznym dla nowotworu? Czasem tak się robi dostarczając chemioterapeutyki do komórek nowotworowych. Niestety w aspekcie technicznym Ci nie pomogę.
Mrs Buka

pershing
Posty: 6
Rejestracja: 30 kwie 2016, o 21:28

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: pershing » 5 maja 2016, o 18:28

Z opisu wynika, że problemem jest zbyt szybka internalizacja białka prowadząca do degradacji. Ja poszedłbym w kierunku blokowania internalizacji. Za internalizację odpowiadają odpowiednie białka np. klatryna, które mają swoje inhibitory. Albo może zastosować jakiś czynnik rozwalający lizosomy, gdzie zachodzi proteoliza (są takie). Pomyślałbym o skoniugowaniu białka z takim związkiem. Szczegóły techniczne dotyczące koniugacji to już musisz sobie znaleźć. Co do identyfikacji to najprostsza jest elektroforeza - po masie cząsteczkowej. Można też pomyśleć o spektrometrii mas (MALDI-TOF) bądź HPLC. Żeby białko oddzielić od innych składników można pomyśleć o liofilizacji, immunoprecypitacji bądź różnego, że się tak wyrażę, sortu chromatografii.

Itachi90
Posty: 5
Rejestracja: 5 maja 2016, o 10:46

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Itachi90 » 6 maja 2016, o 08:00

Dziękuję bardzo! :)

Itachi90
Posty: 5
Rejestracja: 5 maja 2016, o 10:46

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Itachi90 » 8 maja 2016, o 13:57

Szukam i szukam, ale znaleźć nie mogę: czy klatryna ma swój inhibitor? Jeśli tak to jaki i czy takie inhibitory można koniugować z białkiem?

Awatar użytkownika
Erick
Posty: 1637
Rejestracja: 15 paź 2009, o 18:40

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Erick » 14 maja 2016, o 10:58

en.wikipedia.org/wiki/Clathrin
Ostatnie 3 zdania, masz odnośniki do badań. W ogóle polecam angielską wikipedię, mnóstwo informacji z odnośnikami, więc można korzystać bez obawy, że to fake i samemu weryfikować.

Awatar użytkownika
Xenomorph
Posty: 23
Rejestracja: 20 paź 2016, o 09:56
Lokalizacja: LV-426

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Xenomorph » 20 paź 2016, o 12:18

Praca domowa czy pytanie z testu kompetencji na rozmowie kwalifikacyjnej? :)

PEGylacja - jezeli tylko bialko posiada odpowiednie wolne grupy (jakie to juz zalezy od odczynnika ktory zastosujemy). Jezeli nie to mozna zastapic jakis aminokwas lub dodac do lancucha. :) Odczynniki do PEGylacji sa dostepne na rynku i producent dostarcza warunki prowadzenia reakcji. Oczyszczenie produktu za pomoca np. jonowymieniaczy lub HIC (wolny PEG nie bedzie wiazany, PEGylowane bialko bedzie sie wiazalo ale slabiej niz niezmodyfikowane). Metody analityczne - te same ktore byly stosowane dla niezmodyfikowanego bialka :) tylko trzeba wziac pod uwage, ze bedzie mialo zmienione wlasciwosci, wiec bedzie sie inaczej zachowywac. Jezeli bialko ma wiecej wolnych grup to istotne moze byc sprawdzenie czy napewno przylaczylismy tylko jedna czasteczke PEG-u.

joanna383
Posty: 5
Rejestracja: 2 lis 2016, o 07:30

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: joanna383 » 2 lis 2016, o 07:34

Wielkie dzięki za takie konkretne wytłumaczenie, przydało się.

Awatar użytkownika
Xenomorph
Posty: 23
Rejestracja: 20 paź 2016, o 09:56
Lokalizacja: LV-426

Re: Białko terapeutyczne zaproponuj doświadczenie/ POMOCY

Post autor: Xenomorph » 3 lis 2016, o 14:37

Kolejna opcja (podpowiedziana przez znajomego specjaliste od inzynierii bialek) - dolaczenie domeny Fc przeciwciala. Efektem jest calkowicie nowy produkt, analityka pozostaje w zasadzie bez zmian.

ODPOWIEDZ

Kto jest online

Użytkownicy przeglądający to forum: Obecnie na forum nie ma żadnego zarejestrowanego użytkownika i 1 gość