hormon wzrostu myszy

[SKR]

mam pytanie - z czego składa się hormon wzrostu myszy / szczura , jak to uzyskać i jak podawać zwierzakowi

prosze mnie nie jechać. jeśli nie wiecie to po prostu nie piszcie

[Mawr]

z czego składa się hormon wzrostu myszy / szczura

hormon wzrosu to polipeptyd. Z czego sie słada z aminokwasów -)

[ Dodano: Sro Cze 21, 2006 20:07 ]
pl.wikipedia.org/wiki/Hormon_wzrostu

[SKR]

a jak najprościej go uzyskać ?

[Vinci]

najprostrzy sposób to wycisnać to ze szczura
a tak na powiaznie to :
*fragment takinki szczura homogenizuje sie (rozgrabnia) zeby zniszczyć struktury komórek,
*dodaje sie do uzyskaniej zaiwsiny detergentu (uszkodzenie blony komórkowej i uwolnienie DNA).
*Dodjae sie proteazy (enzymu traiwącego białko) aby uwolnic DNA od towarzyszacych mu histonów.
*Teraz dolewa sie fenolu, zeby zdenaturowac niestrwaione białka i i ch fragmenty.
*Czysty DNA zostanie w nienieszającej sie z fenolem wodzie, do odlajen fazy wodnej dodajemy zimnego etanolu i DNA ładnie sie wytrąca w postaci białycg włosków. Jesyeśmy na etapie DNA.
*TEraz do tego co mamy dodajemy restryktaz (otrzymanych naprzyklad z E. Coli), ktore przecinają łańcuch na krotsze fragmenty.
*Roztwór DNA umieszczmy zna bloczku agarozy (taka galaretka) w wyietych studzenkach, bloczek agarozy umiszczamy w roztworze jakiejs soli, dop przeciwleglych biegunów naczyna podłącza sie elektordy i przeprowadza elektroforeze.
*Po pewnym czasie bloczek agarozowy mieszcza sie w roztworze barwiącym DNA. Kazdy z wybarwionych prążków zawiera odcinki DNA odpowidajace np 2000 3000 10 000 par zasad. Prązki wyplukuje sie roztowrem soli i mamy DUZO POCIETYCH FRAGMENTÓW. Teraz trzeba kazdy z nich umiescic w DNa na przykad bakterii.
*Posluża do tego ich plazmidy, przecina sie ich takimi samymi restryktaami jak pierwotne DNA (konce fragmetów beda pasowaly do siebie), uciety plazmid umieszcza sie z fragmentem , który chcemy wprowadzic do bakterii i dodaje sie ligazy ( fragment łaczy sie z plazmidem)
*Zmodyfikowany plazmid (wektor) umieszcza sie w bakterii, gdze jest on powielany przy podzalach a jaggoe informacja realizowana, aby umiescic wektro trzeba bakrerie najpierw na jakis czas włozyc do roztworu CaCl2 o temp 0*C, alby ich sciany komorkwoe sie rozluzniły.
*Teraz bakteiwe uieszca sie na pozywce i hoduje dopuki nie beda widoczne kolonie.
*Teraz trzeba jakos rozpoznac ta wlascica kolonie zawierajaca interesujacy nas fragmet DNA: przenosi sie ja na odpowiednie podloze ktre barwi sie na jakis kolor jesli wystepuje dana substancja.
*Zidentyfikowana kolonie przenosimy do fermantora i mozemy rozpoczac produkcje hormonu

[Mawr]

Po pewnym czasie bloczek agarozowy mieszcza sie w roztworze barwiącym DNA. Kazdy z wybarwionych prążków zawiera odcinki DNA odpowidajace np 2000 3000 10 000 par zasad. Prązki wyplukuje sie roztowrem soli i mamy DUZO POCIETYCH FRAGMENTÓW

Po trawieniu DNA genomowego enzymem restrykcyjnym na zelu nie pojawiają sie prązki. DNA po wybarwieniu widoczny jest w postaci smugi tkz.smiru".

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 17:46 ]
no w sumie pojawiają sie na tle smiru prązki ale jest to rDNA.

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 17:50 ]

*Po pewnym czasie bloczek agarozowy mieszcza sie w roztworze barwiącym DNA. Kazdy z wybarwionych prążków zawiera odcinki DNA odpowidajace np 2000 3000 10 000 par zasad. Prązki wyplukuje sie roztowrem soli i mamy DUZO POCIETYCH FRAGMENTÓW. Teraz trzeba kazdy z nich umiescic w DNa na przykad bakterii.
*Posluża do tego ich plazmidy, przecina sie ich takimi samymi restryktaami jak pierwotne DNA (konce fragmetów beda pasowaly do siebie), uciety plazmid umieszcza sie z fragmentem , który chcemy wprowadzic do bakterii i dodaje sie ligazy ( fragment łaczy sie z plazmidem)
*Zmodyfikowany plazmid (wektor) umieszcza sie w bakterii, gdze jest on powielany przy podzalach a jaggoe informacja realizowana, aby umiescic wektro trzeba bakrerie najpierw na jakis czas włozyc do roztworu CaCl2 o temp 0*C, alby ich sciany komorkwoe sie rozluzniły.

zamiast bawic sie w izolowanie odpowiedniego fragmętu DNA proponowałbym zamówienie go z odpowiedniej biblioteki. troche to kosztuje ale zaoszczedzimy kilkanascie miesięcy pracy.

[Vinci]

hehe Mawr ja tego nie pisałem powaznie a co do tych prazków to tak mam w ksiazce, ale widoczenie byla to jakas wersja uproszczona

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 17:53 ]
jaka jest cena takiego z biblioteki ?

[Mawr]

*Teraz trzeba jakos rozpoznac ta wlascica kolonie zawierajaca interesujacy nas fragmet DNA: przenosi sie ja na odpowiednie podloze ktre barwi sie na jakis kolor jesli wystepuje dana substancja.

wystarczy przeprowadzic analize restrykcyjną plazmidu albo poprostu z sekwencjonowac plazmid

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 17:56 ]
Nim rozpoczniemy produkcje białka nalezy jeszcze nasz gen przeklonowac na jakis plazmid ekspresyjny poza tym trzeba sprewdzic czy bakteri bedą grzecznie produkowac nam to co chcemy.

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 17:57 ]

jaka jest cena takiego z biblioteki ?

szczerze mowiac to nie wiem.

[Vinci]

robiłes kiedys takie rzeczy czy tylko mowisz teretycznie ?

[Mawr]

Czy izolowałem geny z genomowego DNA? nie
Ale troche bawiłem sie DNA. -)

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 18:12 ]
a co do ceny to moze uda mi sięją zaraz znalesc

[ Dodano: Pią Cze 23, 2006 22:32 ]
niestety nie znalazłem
a co do tej całej procedury to najłatwiej byłoby posłuzyc PCR-em.

[Kuba]

A to co napisał Vinci zadziała? Czy może się przydać?

[Vinci]

połacz to co napisaem ja i Mawr, wesprzyj sie jakas ksiazka i produkuj hormony