Spektrofotometria - Oznaczenie zawartości polifenoli w winach
: 14 lis 2017, o 21:26
Mam olbrzymi problem z obliczeniem całkowitej zawartości polifenoli w mg/g wina w przeliczeniu na kwas galusowy. Zupełnie nie wiem, jak się do tego zabrać.
Oznaczenie było robione metodą z z zastosowaniem odczynnika Folina-Ciocalteu. To może po kolei, co robiłam:
I. Wykonałam krzywą wzorcową dla kwasu galusowego według instrukcji:
1. 5 mg kwasu galusowego odważyć w naczynku zakręcanym, rozpuścić w 100 µl etanolu, następnie dodać 900 µl wody, wymieszać i zamknąć.
2. Przygotować odpowiednie rozcieńczenia roztworu kwasu galusowego, dla uzyskania roztworów kalibracyjnych o stężeniach: 0 0,05 0,15 0,25 0,35 i 0,50 mg/ml, by całkowita objętość każdego roztworu kalibracyjnego roztworu wynosiła 1 ml.
3. Do osobnych naczynek pobrać po 20 µl z każdego roztworu kalibracyjnego, dodać po 1,58 ml wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina- Ciocalteua, dobrze wymieszać i pozostawić na 3 min, następnie dodać po 300 µl nasyconego roztworu węglanu sodu, wymieszać i wstawić do termostatu ustawionego na 40ºC na 30 min. (W sumie objętość wyniosła 2 ml) Mierzyć absorbancję przy 765 wobec ślepej próby.
II. Przygotowałam rozcieńczenia win w badanych stężeniach: 1, 3 i 5%.
Do osobnych naczynek pobrać po 20 µl z każdego badanego roztworu , dodać po 1,58 ml wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina- Ciocalteua, dobrze wymieszać i pozostawić na 3 min, następnie dodać po 300 µl nasyconego roztworu węglanu sodu, wymieszać i wstawić do termostatu ustawionego na 40ºC na 30 min. (W sumie objętość wyniosła 2 ml) Mierzyć absorbancję przy 765 wobec ślepej próby.
III. Narysowałam krzywą, gdzie na osi X było stężenie kwasu galusowego [mg/L], a na osi Y Absorbancja i wyznaczyłam równanie: y= 0,00304x - 0,01268
IV. Z równania wyliczyłam stężenie badanej próbki (1%) - wyszło mi 112,8 mg/L
I teraz pytanie - w jaki sposób mam obliczyć całkowitą zawartość polifenoli w mg/g wina w przeliczeniu na kwas galusowy?
Oznaczenie było robione metodą z z zastosowaniem odczynnika Folina-Ciocalteu. To może po kolei, co robiłam:
I. Wykonałam krzywą wzorcową dla kwasu galusowego według instrukcji:
1. 5 mg kwasu galusowego odważyć w naczynku zakręcanym, rozpuścić w 100 µl etanolu, następnie dodać 900 µl wody, wymieszać i zamknąć.
2. Przygotować odpowiednie rozcieńczenia roztworu kwasu galusowego, dla uzyskania roztworów kalibracyjnych o stężeniach: 0 0,05 0,15 0,25 0,35 i 0,50 mg/ml, by całkowita objętość każdego roztworu kalibracyjnego roztworu wynosiła 1 ml.
3. Do osobnych naczynek pobrać po 20 µl z każdego roztworu kalibracyjnego, dodać po 1,58 ml wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina- Ciocalteua, dobrze wymieszać i pozostawić na 3 min, następnie dodać po 300 µl nasyconego roztworu węglanu sodu, wymieszać i wstawić do termostatu ustawionego na 40ºC na 30 min. (W sumie objętość wyniosła 2 ml) Mierzyć absorbancję przy 765 wobec ślepej próby.
II. Przygotowałam rozcieńczenia win w badanych stężeniach: 1, 3 i 5%.
Do osobnych naczynek pobrać po 20 µl z każdego badanego roztworu , dodać po 1,58 ml wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina- Ciocalteua, dobrze wymieszać i pozostawić na 3 min, następnie dodać po 300 µl nasyconego roztworu węglanu sodu, wymieszać i wstawić do termostatu ustawionego na 40ºC na 30 min. (W sumie objętość wyniosła 2 ml) Mierzyć absorbancję przy 765 wobec ślepej próby.
III. Narysowałam krzywą, gdzie na osi X było stężenie kwasu galusowego [mg/L], a na osi Y Absorbancja i wyznaczyłam równanie: y= 0,00304x - 0,01268
IV. Z równania wyliczyłam stężenie badanej próbki (1%) - wyszło mi 112,8 mg/L
I teraz pytanie - w jaki sposób mam obliczyć całkowitą zawartość polifenoli w mg/g wina w przeliczeniu na kwas galusowy?